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            枸杞子青海量大寧夏歷史久 哪個產地含量更優?

            發布時間:2017-07-18 14:57:11   來源:本站   作者:   次瀏覽

            枸杞子為茄科植物寧夏枸杞(LyciumbarbarumL.)和枸杞(L.Chinese)的干燥成熟果實, 是馳名中外的名貴中藥材和保健品。在我國主要種植地區有寧夏、青海、甘肅、新疆、內蒙古和河北等, 但由于生態環境和氣候等因素的影響, 枸杞的品質表現出一定差異?,F代藥理學研究認為, 在枸杞的化學成分中,有藥理作用的主要有枸杞多糖、維生素、氨基酸、黃酮及環肽類等有機成分, 還有人體必需的微量元素錳(Mn)、鋅(Zn)、鐵(Fe)和硒(Se)等, 它們含量的高低是評價枸杞質量優劣的重要方面。


              不同產地枸杞子中微量元素和黃酮含量評測


              本實驗選取了11個不同產地枸杞子, 對其微量元素Mn、Cu、Zn、Fe和Se及黃酮含量進行了分析測定, 為了解不同產地枸杞子的質量提供參考。


              枸杞樣品來源及處理,枸杞子樣品取自寧夏中寧、寧夏固原原洲高羊村、寧夏同心、寧夏惠農、寧夏平羅頭閘、寧夏銀川南梁、寧夏銀川枸杞研究所、新疆精河、寧夏賀蘭山東麓、青海和河北。樣品用蒸餾水反復沖洗5 ~6次后, 放入瓷坩堝, 在60~70℃恒溫箱內烘干, 然后粉碎過60目篩,待用。


              枸杞子中微量元素Mn、Cu、Zn和Fe含量的測定。樣品的測定:稱取干燥樣品2g(精確至0.0001g), 放入100ml 三角瓶中, 加入18ml濃硝酸, 6ml高氯酸, 溶液呈棕黃色, 瓶口放上小漏斗, 室溫放置過夜, 于180C電熱板上加熱至溶液澄清, 待大量冒白煙時取下, 冷至室溫, 溶液若仍顯黃色時加入1mlH2O2 , 再加熱至溶液呈淡黃色或乳白色即可。冷卻后轉移至50ml容量瓶中, 1%HNO3定容到刻度。用原子吸收分光光度計進行測定, 同時做空白實驗。原子吸收分光光度計工作條件見表1。


            表1  儀器測定條件


              標準溶液的配制:按原子吸收分光光度計測定微量元素的標準溶液的配制原則配制。依表1原子吸收分光光度計工作條件測定。


              枸杞子中微量元素Se 含量的測定樣品的測定:稱取枸杞試樣2g(精確至0.0001)于燒杯中, 加入25 ml 濃硝酸, 放置過夜, 次日置于電熱板上低溫消解片刻取下冷卻后緩緩加入6ml高氯酸, 繼續消解至除去殘余的硝酸, 冷卻后轉移至25ml容量瓶中, 以6mol/L HCl定容至刻度, 搖勻后用原子熒光光譜儀測量Se含量, 同時做空白實驗。原子熒光光譜儀測量程序見表2。


            表2  原子熒光光譜儀測量程序

              標準溶液的配制:按原子熒光光譜儀測定Se標準溶液的配制原則配制。依表2原子熒光光譜儀測量程序測定。不同產地枸杞子中微量元素和黃酮含量不同產地枸杞子中微量元素Cu,Zn,Mn,Fe和Se及黃酮含量見表3。實驗結果經方差分析后可以看出不同產地枸杞子中微量元素及黃酮含量差異顯著(F0.05=2.18)。用SNK 法進一步進行兩兩均值比較檢驗, 同一亞組內, 含量均值無明顯差異, 不同亞組間含量均值差異顯著(α=0.05)。11個產地的枸杞中黃酮含量被分為7個亞組, 不同產地枸杞子中黃酮含量的趨勢為:寧夏平羅頭閘<河北<新疆精河<寧夏惠農<寧夏固原原洲高羊村, 寧夏賀蘭山東麓, 寧夏中寧<青海, 寧夏銀川枸杞研究所<寧夏同心, 寧夏銀川南梁。黃酮類物質具有止咳、平喘、祛痰之功效, 并能擴張冠狀動脈及降低血膽固醇。


            表3  不同產地枸杞子中微量元素和黃酮含量及方差分析(x±s,n=4)


              11個產地的枸杞中Mn 含量被分為8個亞組,微量元素Mn 含量為:寧夏中寧<寧夏固原原洲高羊村, 寧夏惠農<寧夏銀川南梁, 寧夏銀川枸杞研究所<寧夏平羅頭閘, 寧夏同心, 新疆精可<寧夏賀蘭山東麓<河北<青海。Cu含量被分為5個亞組,Cu含量寧夏中寧, 河北, 寧夏固原原洲高羊村, 寧夏平羅頭閘, 寧夏惠農, 寧夏同心<寧夏銀川南梁<青海<新疆精河<寧夏銀川枸杞研究所, 寧夏賀蘭山東麓。Zn含量被分為7個亞組, 其含量寧夏中寧, 寧夏平羅頭閘<寧夏惠農, 寧夏銀川南梁<寧夏固原原洲高羊村<寧夏銀川枸杞研究所<寧夏同心, 寧夏賀蘭山東麓, 青海<新疆精河<河北。Fe含量被分為4個亞組, 其含量為寧夏中寧, 寧夏平羅頭閘,夏固原原洲高羊村, 新疆精河<寧夏銀川枸杞研究所, 河北<寧夏惠農, 青海, 寧夏銀川南梁, 寧夏賀蘭山東麓<寧夏同心。Se含量被分為2個亞組, 它的含量河北, 寧夏銀川枸杞研究所, 寧夏同心, 寧夏惠農, 寧夏平羅頭閘, 寧夏賀蘭山東麓, 寧夏固原原洲高羊村, 寧夏中寧<寧夏銀川南<新疆精河, 青海。


            表4  不同產地枸杞子中微量元素Zn/Cu 的比值及方差分析


              不同產地枸杞子中Zn/Cu 的比值不同產地枸杞子中微量元素Zn/Cu的比值及方差分析見表4, 由表可知不同產地枸杞子中微量元素Zn/Cu 比值差異顯著(F0.05 =2.18)。用SNK法進行兩兩均值比較檢驗(α=0.05), 不同產地枸杞子中微量元素Zn/Cu 的比值被分為4 個亞組, Zn/Cu 的比值寧夏銀川枸杞研究所, 寧夏賀蘭山東麓<寧夏平羅頭閘, 寧夏銀川南梁, 新疆精河, 寧夏中寧,青海, 寧夏惠農, 寧夏固原原洲高羊村<寧夏同心<河北。枸杞的生理、藥理活性應該是枸杞多糖、維生素、氨基酸、黃酮及環肽類等有機成分協同作用的結果, 對微量元素的生理作用也不能只單看其絕對含量, 而應結合其不同元素的比例來看。據報道, 人體多種疾病血清中Zn/Cu 值較低, 了解不同地區枸杞子Zn/Cu比值, 有很大意義。


              寧夏同心和寧夏銀川南梁枸杞黃酮含量明顯高于其它地區, 平均含量669.5mg/100g。由此可見,黃酮類物質可能是寧夏枸杞重要的抗氧化成分。寧夏銀川南, 新疆精河和青海枸杞子中含Se較豐富, 平均含量0.143μg/g 。富硒枸杞具有提高人體免疫力、預防心血管疾病及預防各類腫瘤的作用。


              不同產地枸杞子中維生素C含量測定


              枸杞子中含有豐富的維生素C。維生素C可用于預防和治療壞血病, 具有清除體內自由基增強機體抵抗力的作用。筆者采用2, 4*二硝基苯肼比色法對不同產地的枸杞子中維生素C 的含量進行了測定比較?,F報道如下。


              加樣回收率的測定* 移取已知維生素C 含量的內蒙枸杞子待測液2.0mL, 分別加入維生素C 對照品溶液1.0,2.0, 3.0, 4.0, 5.0 mL, 按下方法測定, 計算加樣平均回收率, 結果見表5。平均回收率為100.44%, RSD 為2.34%(n=5)。


            表5 加樣回收實驗(n= 5)


              穩定性考察* 取維生素C標準工作液(10mg*L-1)30mL于50mL量瓶中, 用1%草酸稀釋至刻度。移取2mL于具塞試管中, 按標準曲線項下操作, 每隔1h 測定1次A值。在8h內的A值分別為0.045, 0.048, 0.040, 0.045, 0.043,0.044, 0.044, 0.045, 穩定性好。


              精密度考察,取10,6,2mg*L- 1的對照品溶液各2mL, 按標準曲線項下在540nm處測定吸收度, 相同室溫下平行測定3次, 計算其日內、日間的RSD%, 結果見表2。樣品的含量測定*稱取枸杞子粗粉15.00g, 置于50mL具塞三角瓶中, 加2%草酸20mL浸泡過夜, 用組織搗碎勻漿機勻漿。精密稱取勻漿15.00g于100mL量瓶中, 加1%草酸稀釋至刻度, 搖勻, 放置5h, 濾過。移取濾液10mL于具塞三角瓶中, 加1%草酸10mL, 活性炭1角匙, 10min后過濾。吸取2mL濾液于試管中, 以2mL1%草酸作空白, 以下操作按標準曲線項下操作。根據回歸方程計算維生素C含量[mg*(100g)-1] , 結果見表6。枸杞子中維生素C含量測定法有碘量法、熒光分光光度法、2,6*二氯吲哚酚法等。本文采用2, 4*二硝基苯肼比色法測定枸杞子中維生素C的含量, 具有簡單易行、快速準確的特點。維生素C 是枸杞子中的重要成分之一, 實驗證明, 枸杞子由于產地不同, 其維生素C的含量相差懸殊, 內蒙枸杞子中維生素C含量明顯高于河北、山東、寧夏產枸杞子。


            表6 樣品含量測定結果(n= 3)


              不同產地枸杞子中甜菜堿含量的評測


              甜菜堿(betaine)作為枸杞中的一種重要成分,在體內起甲基供應體的作用,可以抗脂肪肝。


              通過對9個樣品的甜菜堿峰面積進行測定,進而計算出各樣品甜菜堿含量,最高為0.5880%,最低為0.3004%,均大于0.3000%,達到《中國藥典》2015版規定標準;對9個樣品含量進行比較,結果顯示,不同枸杞子甜菜堿含量存在差異,見表7。由表7可以看出,甘肅永登縣上川鎮所產枸杞子的甜菜堿含量為0.4325%,在所有供試樣品中列第3位,處于較高水平; 對不同產地的枸杞子樣品進行品種內對比后發現,不同產地的同一品種枸杞子,甜菜堿含量差異具有統計學意義,其中寧夏所產枸杞子除平羅縣頭閘鎮樣品外,甜菜堿含量均較高,整體處于優勢地位,其中就包括最高的中寧縣舟塔鄉所產枸杞子,甜菜堿含量為0.5880%;此外對不同品種的枸杞子進行對比發現,品種不同甜菜堿含量差異明顯,其中甘肅景泰縣草窩灘鄉所產“蒙杞1號”枸杞子,甜菜堿含量為0.4045%,處于中等偏上水平,而青海諾木洪農場的“柴杞”則含量較低。


            表7 不同產地枸杞子甜菜堿含量比較


              供試樣品枸杞子的色譜圖呈現不同程度的差異,同品種枸杞子中亦有較多色譜圖相似度較差,證明產地條件對枸杞子甜菜堿色譜圖的特征性有影響。9個不同枸杞子樣品中甜菜堿含量有明顯差異,其中同品種“寧杞1 號”枸杞甜菜堿含量從0.3004%到0.5880%不等,而部分“寧杞1號”枸杞子與“蒙杞1號、“柴杞”甜菜堿含量差異亦具有統計學意義,證明同一枸杞子品種產地不同其甜菜堿含量有差異、不同枸杞子品種間甜菜堿含量也存在不同程度的差異,產地條件與品種因素對甜菜堿含量都有影響,這與前人部分研究結論一致。


              在進行高效液相色譜測定時,曾選用C18色譜,但效果較差,分析其原因可能是由于甜菜堿為季胺型水溶性生物堿,極性較大所致,故選擇NH2色譜柱,結果分離效果良好; 實驗中還分別在檢測波長195,210,230nm下進行色譜分析,結果在230nm下各組分色譜峰均有較大吸收。實驗進一步肯定了HPLC 在測定枸杞子甜菜堿含量方面準確度高、重現性好的優勢; 研究主體甘肅永登縣上川鎮所產枸杞子的甜菜堿含量在9個樣品中處第3位,就甜菜堿這一藥用成分而言品質較優,這一結果有助于日后在甘肅省秦王川地區繼續開展枸杞的栽培與選育工作。


              不同產地枸杞子中5個酚酸類成分的評測


              有關枸杞化學成分的研究有多糖、甜菜堿、黃酮、原花青素、β-胡蘿卜素、東莨菪內酯、農藥殘留、枸杞子中脂溶性成分以及中藥處方中枸杞子的定性鑒別等。


              取所收集的不同產地的枸杞子,按方法制備供試品溶液。按色譜條件進樣測定,采用標準曲線法計算樣品中原兒茶醛、兒茶素、表兒茶素、咖啡酸和阿魏酸的含量,結果見表8~10。在線凈化——可以簡化或免去后續的凈化過程ASE是多組分高效萃取技術,在萃取過程中一些干擾物質有時會被一起萃取出來,這些共萃取物可能會干擾分析或損害分析儀器。在供試品溶液制備中若直接加50%甲醇水溶液提取,經HPLC分析發現色譜峰很多,枸杞子中的脂類物質對部分酚酸類化合物成分造成一定干擾,無法分離,且脂溶性成分會附著在專用的色譜柱中,對色譜柱造成一定的損害。故在用50% 甲醇水溶液提取前先加除脂溶劑石油醚,以除去大部分的脂溶性成分,減免干擾峰的出現,使各酚酸類成分與其他雜質峰分離度均大于1.5。




              ASE提取條件的選擇(1)提取溶劑: 考察了乙醇,40%、50%、60%甲醇水溶液;(2)提取溫度:考察了40、50、60、70℃;(3)提取靜置時間:考察5、10、15、20、30min;(4)提取循環次數: 考察了1、2、3、4次。結果表明在60℃下用50%甲醇水溶液靜置提取15min,循環提取1次時提取效率最高。



              色譜條件的選擇(1) 在對流動相等條件考察時發現,等度洗脫分析時間較長,且極性相近的成分較多,對測定組分有一定的干擾,故選用梯度洗脫。不僅達到物質色譜峰的分離度要求,而且大大減短了出峰時間;(2)對不同的流動相乙腈-水、甲醇-水和甲醇-0.04%冰乙酸水溶液洗脫體系進行了考察,經分析可知甲醇-0.04%冰乙酸水溶液洗脫體系可達到分離度要求。加入一定量的冰乙酸抑制了酸的解離,使色譜峰形較佳,故選用甲醇-0.04% 冰乙酸水溶液。(3)在190~400nm波長范圍內進行紫外掃描。通過對色譜圖的分析,結果各酚酸類成分在280nm 附近出峰多,面積大,且各色譜峰分離度良好,故選280nm作為檢測波長。


              結果分析由實驗測定結果可知:(1)所有樣品中5個酚酸平均含量大體上依次為表兒茶素>原兒茶醛>兒茶素> 咖啡酸>阿魏酸,但也有特例;(2)不同產地樣品中總酚酸含量大體上依次為部分青海樣品>內蒙古>寧夏>甘肅> 新疆,但也有部分青海產地枸杞子中總酚酸含量較低;(3)同產地樣品不同種之間總酚酸含量有所差異: 野生枸杞子依次為紅果枸杞子>黃果枸杞子>黑果枸杞子,而種植枸杞子依次為黃果枸杞子>黑果枸杞子>紅果枸杞子;(4)同產地不同野生和人工栽培樣品中總酚酸含量不一: 青海德令哈尕海鎮樣品總酚酸含量人工栽培>野生,具有顯著性差異; 青海都蘭縣諾木洪樣品總酚酸含量人工栽培與野生枸杞子相當,無顯著性差異。


              有文獻報道“固相萃取快速測定黑果枸杞果汁中酚酸類化合物”,該文章測定的是黑果枸杞Lycium ruthenicum Murr. 果汁中6個酚酸類成分沒食子酸、原兒茶素、兒茶素、綠原酸、咖啡酸和丁香酸的含量,包括本文中的酚酸類成分兒茶素和咖啡酸,但其他成分不同。本文使用快速溶劑萃取儀(ASE350) 用50%甲醇水溶液提取出枸杞子中酚酸類成分原兒茶醛、兒茶素、表兒茶素、咖啡酸和阿魏酸,并采用RP-HPLC法對其進行了含量測定,擴充了枸杞子中其他酚酸類成分。結果原兒茶醛、兒茶素、表兒茶素、咖啡酸和阿魏酸的濃度分別在

              24.05~601.2mg·L-1、4.396~109.9mg·L-1、17.06~426.6mg·L-1、0.7104~17.76mg·L-1、1.085~27.12 mg·L-1 范圍內與峰面積呈良好的線性關系;平均加樣回收率(n=6) 分別為97.4%、97.7%、98.7%、95.5%、96.3%。本方法快速、準確,重現性好,適用于枸杞子中5 個酚酸類成分的含量測定,可為枸杞的質量控制提供依據。

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